缺氧會(huì)導(dǎo)致機(jī)體臟器功能、內(nèi)分泌、組織形態(tài) 等出現(xiàn)一系列代償性變化。大腦本身無葡萄糖與 氧氣的儲(chǔ)備，完全依賴血液流通供應(yīng)養(yǎng)料。因此， 大腦對(duì)缺血缺氧的耐受力極差，血液運(yùn)行受阻易導(dǎo) 致腦組織水腫、神經(jīng)細(xì)胞受損、神經(jīng)功能紊亂等一 系列腦損傷。這種腦損傷主要與神經(jīng)細(xì)胞凋亡、 氧自由基大量累積有關(guān)。

1 材料與方法

1. 1 儀器

全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀（MEK-7222K），日本光電 工業(yè)株式會(huì)社；電子天平（Sartorius BS110s），北京賽 多利斯天平有限公司；鼓風(fēng)干燥箱（DHG-9140A）， 上海一恒科學(xué)儀器有限公司；超低溫冰箱（DW86L828），青島海爾特種電器有限公司；倒置數(shù)碼顯 微鏡（BDS400），重慶奧特光學(xué)有限公司；渦旋混合 器（GL-88B），海門市其林貝爾儀器制造有限公司。

1. 2 藥物和試劑

泊洛沙姆 188（poloxamer 188）、泊洛沙姆 407 （poloxamer 407），德國(guó)巴斯夫（BASF）公司；CBD，云 南漢素生物科技有限公司；知母皂苷 BⅡ（純度＞ 98%），軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院輻射醫(yī)學(xué)研究所 馬百平研究員提供；葛根素（純度 98%），西安昊軒生物科技有限公司；G20（批號(hào)：20171102，純度＞ 99%）、血 細(xì) 胞 分 析 用 稀 釋 液 MEK- 640（批 號(hào) ： 19011078）、生理鹽水（批號(hào)：1805293204），石家莊 四藥有限公司；乙醇（批號(hào)：20190113），北京市通廣 精細(xì)化工公司；超純水，實(shí)驗(yàn)室自制。

1. 3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

35只SPF級(jí)健康雄性BALB/c小鼠，體質(zhì)量18~ 22 g，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，動(dòng)物許 可證號(hào)：SCXK（京）2016-0006，動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境溫度為 21~26℃，濕度 45%~55%。所有實(shí)驗(yàn)操作均遵循本 單位實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)規(guī)定。

1. 4 空白及載藥水凝膠制備

精密稱取12 g泊洛沙姆407、2 g泊洛沙姆188， 加超純水45 ml，溶脹24 h后，得到空白凝膠。分別 精密稱取150 mg 葛根素、G20、知母皂BⅡ、CBD，溶 于適當(dāng)體積的對(duì)應(yīng)溶劑，再加所需體積的空白凝膠 攪拌溶解定容即得4種水凝膠。其對(duì)應(yīng)溶劑配方如 下： 葛根素（30 mg/ml）∶1.4 ml乙醇和3.6 ml空白凝 膠；G20（30 mg/ml）：超純水1.5 ml和空白凝膠3.6 ml； 知母皂苷 BII（25 mg/ml）∶1.5 ml 超純水和 3.5 ml 空 白凝膠；CBD（25 mg/ml）：600 μl丙二醇、800 μl乙醇 和空白凝膠4.6 ml。

1. 5 分組及給藥方案

SPF 級(jí)健康雄性 BALB/c 小鼠，隨機(jī)分為 7 組 （n=5）：正常組、生理鹽水組、空白凝膠組、葛根素水 凝膠組（30 mg/kg）、G20 水凝膠組（30 mg/kg）、知母 皂 苷 BⅡ 水 凝 膠 組（25 mg/kg）、CBD 水 凝 膠 組 （25 mg/kg）。4種藥物水凝膠組按給藥劑量每日單 側(cè)鼻孔給藥20 μl；空白凝膠組單側(cè)鼻孔給藥空白水 凝膠 20 μl；生理鹽水組單側(cè)鼻孔給藥 0.9%生理鹽 水20 μl；正常組不作任何處理。

1. 6 外周血細(xì)胞計(jì)數(shù)

連續(xù)給藥8 d后，最后1次給藥1 h后小鼠尾靜 脈取血。小鼠尾靜脈取血10 μl，迅速注入血細(xì)胞分 析用稀釋液中，輕輕搖勻，使血液均勻分散在與全 自動(dòng)血細(xì)胞分析儀匹配的成品稀釋液中，避免凝血 塊出現(xiàn) 。全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀檢測(cè)紅細(xì)胞（red blood cell，RBC）計(jì)數(shù)、血紅蛋白（hemoglobin，HGB） 含量、白細(xì)胞（white blood cell，WBC）計(jì)數(shù)。

1. 7 常壓密閉缺氧實(shí)驗(yàn)

小鼠取血完成后，用酒精棉球擦拭傷口止血。 隨后將小鼠置盛有鈉石灰和濾紙的 250 ml 廣口瓶中（鈉石灰和濾紙用于吸收CO2和水），瓶口涂抹凡 士林后密封，計(jì)時(shí)至小鼠呼吸停止，即為小鼠在缺 氧環(huán)境下標(biāo)準(zhǔn)缺氧耐受時(shí)間 ，分別計(jì)算與生理鹽 水組相比的標(biāo)準(zhǔn)缺氧時(shí)間（T），公式如下 ： T=T0×100（/ V0-W0/0.94），式中T0為小鼠耐缺氧時(shí) 間（min）；V0為廣口瓶體積（ml）；W0為小鼠體質(zhì)量（g）。

2 結(jié)果

2. 1 載藥水凝膠能明顯延長(zhǎng)

小鼠常壓密閉缺氧條 件下標(biāo)準(zhǔn)缺氧耐受時(shí)間 與生理鹽水組比較，G20和CBD水凝膠組能顯 著延長(zhǎng)常壓密閉缺氧小鼠的標(biāo)準(zhǔn)缺氧耐受時(shí)間 （P＜0.01，P＜0.05）。

2. 2 外周血細(xì)胞計(jì)數(shù)改變

葛根素、知母皂苷 BⅡ的 RBC 數(shù)、HGB 數(shù)與生 理鹽水組無顯著性差異，而G20、CBD組RBC（P＜0.01， P＜0.05）、HGB（P＜0.05，P＜0.05）數(shù)量與生理鹽水 組比較顯著升高。空白凝膠組、各給藥組WBC數(shù)與 生理鹽水組比無顯著性差異，G20組略有升高，但無 顯著性差異。

2. 3 載藥水凝膠減輕腦組織病理損傷、降低HIF-1α 表達(dá)

正常小鼠腦組織血管清晰可見，神經(jīng)細(xì)胞狀態(tài) 完整，神經(jīng)元無明顯損傷。與正常組相比，生理鹽水組和空白凝膠組小鼠的海馬和皮質(zhì)區(qū)神經(jīng)元細(xì) 胞呈彌漫性水腫，血管與組織之間形成較大縫隙， 細(xì)胞核固縮深染，排列較亂、密集，說明密閉缺氧對(duì) 小鼠神經(jīng)細(xì)胞造成腦損傷；G20 組病變有所改善， CBD組、葛根素組和知母皂苷BⅡ組較空白凝膠組 稍有改善，仍有部分核固縮深染。

3 討論

本研究采用泊洛沙姆制備的載藥水凝膠，藥物 溶解后均勻分散在凝膠基質(zhì)中，可實(shí)現(xiàn)藥物到達(dá)鼻 腔后形成半固體凝膠狀，具有緩釋效果。同時(shí)通過 鼻腔給藥，實(shí)現(xiàn)藥物通過嗅黏膜上皮細(xì)胞以及三叉 神經(jīng)通道進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)鼻腔腦靶向。



 

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