白藜蘆醇（Resveratrol，RES），化學名為 3，5，4’-三 羥基芪，是非黃酮類多酚化合物，其主要存在于花生、 葡萄、虎杖等植物中。研究表明，RES具有廣泛的藥 理作用，主要包括免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗炎、抗病毒、保護 心血管等作用。RES 屬于生物藥劑學分類系統(tǒng)（BCS）Ⅱ藥物，其易溶于乙醇、甲醇、二甲基亞砜等有機 溶劑，然而在水中的溶解度極低，僅為30 μg/mL，且 具有光不穩(wěn)定性。由于RES的水溶性差、性質(zhì)不穩(wěn)定、 生物利用度低，限制了其在臨床上的應用。

1 材料

1.1 儀器

FA1004 精密電子天平（天津天馬衡基儀器有限公 司）；LC-2010A 高效液相色譜儀（日本島津公司）；Vortex-5 渦旋混合器（海門市其林貝爾儀器制造有限公司）； TGL-16g 高速離心機（上海安亭科學儀器廠）；UV1600 紫外分光光度計（上海美普達儀器有限公司）；Bioq-8000 噴霧干燥儀[匯和堂生物工程設(shè)備（上海）有限公司]。

1.2 藥品與試劑

RES 原料藥（武漢遠成共創(chuàng)科技有限公司，批號： 20171225，純度：98％）；RES對照品（南京森貝伽生物科 技有限公司，批號：111535-201502，純度：98％）；卡馬西 平對照品（內(nèi)標，上海哈靈生物科技有限公司，批號： 100142-201605，純度：98％）；RES/HP-β-CD/Chitosan（遼 寧中醫(yī)藥大學藥學院自制，批號：20180321，RES 含量： 12％）；HP-β-CD（山東濱州智源生物科技有限公司，批 號：20171201）；Chitosan（濰坊海之源生物制品有限公 司，批號：160815A）；乙腈（瑞典歐森巴克化學公司，色譜 級）；醋酸（天津市科密歐化學試劑有限公司）。

1.3 動物

健康SD大鼠18只，♂，體質(zhì)量（250±20）g，由遼寧 長生生物技術(shù)股份有限公司提供，實驗動物生產(chǎn)許可證 號為SCXK（遼）2015-0001。

2 方法與結(jié)果

2.1 制劑中RES的含量測定

2.1.1 紫外吸收波長的選擇

取干燥至恒質(zhì)量的 RES 對照品適量，置于量瓶中，加 1％醋酸 10 mL，超聲（功 率：180 W，頻率：59 kHz，時間：2 min，下同）溶解，并用 無水乙醇稀釋成質(zhì)量濃度為5 μg/mL的溶液，同法配制 相應濃度的輔料溶液，采用紫外分光光度法，在 200～ 400 nm 波長范圍內(nèi)進行紫外掃描。結(jié)果顯示，RES 在 307 nm波長處有最大吸收，輔料對其測定無干擾，故選 擇307 nm 波長作為 RES 的含量測定波長。

2.1.2 標準曲線的繪制

精密稱取干燥至恒質(zhì)量的 RES 對照品 30 mg，置于 100 mL 量瓶中，加 1％醋酸 10 mL，超聲溶解，并用無水乙醇定容至刻度，制成RES貯 備液。分別精密移取 RES 貯備液 0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0 mL，置于100 mL量瓶中，無水乙醇稀釋至刻 度，搖勻，制成質(zhì)量濃度為1.8、2.4、3.0、3.6、4.2、4.8、5.4、 6.0 µg/mL 的標準系列溶液。采用紫外分光光度法，在 307 nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標（y），質(zhì)量 濃度為橫坐標（x）進行回歸分析，得回歸方程為 y＝ 0.130 1x－0.009 2（R2 ＝0.999 7），結(jié)果表明，RES質(zhì)量濃 度在1.8～6.0 µg/mL范圍內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系。

2.1.3 精密度試驗

取 RES/HP-β-CD/Chitosan，研細， 精密稱取適量，置于100 mL量瓶中，加1％醋酸10 mL， 超聲，使RES溶解，放冷，加無水乙醇定容至刻度，搖勻， 經(jīng) 0.45 μm 微孔濾膜濾過，精密量取續(xù)濾液 1 mL，置于 100 mL量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，制成RES質(zhì)量 濃度分別為 2.8、4.2、5.4 μg/mL（低、中、高質(zhì)量濃度）的 供試品溶液。在307 nm波長處測定供試品溶液中RES 吸光度，每個濃度重復測定3次，計算日內(nèi)精密度；連續(xù) 測定3 d，計算日間精密度。結(jié)果顯示，低、中、高質(zhì)量濃 度供試品溶液的日內(nèi)RSD分別為0.30％、0.32％、0.25％ （n＝3）；日間RSD分別為0.48％、0.21％、0.27％（n＝3）， 均符合方法學要求。

2.1.4 回收率試驗

分別稱取 24、30、36 mg 的 RES 對 照品以及 RES/HP-β-CD/Chitosan 相應處方量的輔料于 100 mL量瓶中，加1％醋酸10 mL，超聲，使RES溶解，放 冷，加無水乙醇定容至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾 液1 mL，置于100 mL量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度， 搖勻，每個濃度制備3份，在307 nm波長處測定RES吸 光度，計算含量。以RES的測得值與加入值進行比較， 計算回收率。結(jié)果顯示，平均回收率分別為 100.00％、 100.24％、99.70％（n＝3），符合方法學要求。


3 討論

本課題組先通過制備RES/HP-β-CD 提高RES的體 外釋放度；再利用Chitosan是自然界廣泛存在的多糖，具 有良好的生物相容性、生物黏附性的特性，且對細胞無 毒 ，對 RES/HP-β-CD 進行改良，制得 RES/HP-β-CD/ Chitosan。本文體外釋放度試驗和大鼠體內(nèi)藥動學研究均表明，與RES原料藥比較，RES/HP-β-CD的體外釋放 度明顯增加，體內(nèi)藥物濃度也明顯增加；與 RES/HP-βCD 比較，RES/HP-β-CD/Chitosan 的釋放明顯減緩；且 RES/HP-β-CD/Chitosan 的 AUC0-12 h是 RES 原料藥的 5.5 倍。該緩釋載藥系統(tǒng)提高藥物生物利用度的主要原因 如下：
（1）由于Chitosan在稀酸條件下，氨基質(zhì)子化，形成 NH3+ 。質(zhì)子化后，正電荷互相排斥使得Chitosan分子鏈 呈舒展狀態(tài)，黏度增大，在微球表面形成凝膠，延緩藥物 釋放；
（2）由于細胞膜表面為負電荷，通過正、負電荷吸 引Chitosan與黏膜產(chǎn)生黏附作用，延長藥物在胃腸道的 滯留時間，從而增加藥物生物利用度；
（3）Chitosan可 以改變 F肌動蛋白（F-actin）的分布從而影響細胞間緊密 連接的，通過打開連接增加黏膜的通透性，使藥物更好 地吸收。


 

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